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分光光度計(jì)知識(shí)全匯總!
更新時(shí)間:2021-01-26   點(diǎn)擊次數(shù):2399次
  分光光度計(jì)是用不連續(xù)的波長(zhǎng)采樣反射物體或透射物體的一種測(cè)量?jī)x器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同,對(duì)不同波長(zhǎng)光線的吸收能力也不同,因此,每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長(zhǎng)的混合光中,將每一種單色光分離出來(lái),并測(cè)量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。
 
  分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見(jiàn)光區(qū),分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光,其光譜帶寬大不超過(guò)3-5nm,在紫外區(qū)可到1nm以下,來(lái)自棱鏡或光柵,具有較高的精度。
 
  分光光度計(jì)可分為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)(或比色計(jì))、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。
 
  項(xiàng)目對(duì)分析結(jié)果的影響
 
  1、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度
 
  分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對(duì)應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個(gè)吸收峰的波長(zhǎng)。由于儀器的制造和調(diào)整誤差,單色光的實(shí)際波長(zhǎng)與儀器的波長(zhǎng)讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度,對(duì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是,當(dāng)吸收峰寬度較小,而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直,此時(shí)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。
 
  2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度
 
  很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測(cè)試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測(cè)試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
 
  3、雜散光
 
  雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光,隨著樣品濃度的增加,雜散光的影響也隨之增大,將給分析結(jié)果帶來(lái)一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測(cè)器的靈敏度均明顯減弱,雜散光的影響更不能忽視。因此,雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
 
  使用與維護(hù)
 
  1、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng),需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測(cè)量。
 
  2、指針式儀器在未接通電源時(shí),電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況,需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
 
  3、比色皿使用完畢后,請(qǐng)立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。
 
  4、操作人員不應(yīng)輕易動(dòng)燈泡及反光鏡燈,以免影響光效率。
 
  5、WFZ800-DA、756型等分光光度計(jì),由于其光電接收裝置為光電倍增管,它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大,因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào),而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移,靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn),在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,因此在預(yù)熱時(shí),應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿,避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
 
  6、放大器靈敏度換擋后,必須重新調(diào)零。
 
  7、比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用,否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
 
  具體方法如下:分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液,把儀器置于某一波長(zhǎng)處,石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水,玻璃比色杯:700nm處裝蒸餾水,將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%,測(cè)量其他各池的透射比值,記錄其示值之差及通光方向,如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用,若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。
 
  典型故障及其排除方法
 
  1、儀器不能調(diào)零。可能原因:
 
  a.光門(mén)不能*關(guān)閉。解決方法:修復(fù)光門(mén)部件,使其*關(guān)閉。
 
  b.透過(guò)率“100%”旋到底了。解決方法:重新調(diào)整“100%”旋鈕。
 
  c.儀器嚴(yán)重受潮。解決方法:可打開(kāi)光電管暗盒,用電吹風(fēng)吹上一會(huì)兒使其干燥,并更換干燥劑。
 
  d.電路故障。解決方法:檢修電路。
 
  2、儀器不能調(diào)“100%”,可能原因:
 
  a.光能量不夠。解決方法:增加靈敏度倍率檔位,或更換光源燈(盡管燈還亮)。
 
  b.比色皿架未落位。解決方法:調(diào)整比色皿架使其落位。
 
  c.光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法:更換部件。
 
  d.電路故障。解決方法:調(diào)修電路。
 
  3、測(cè)量過(guò)程中,“100%”點(diǎn)經(jīng)常變動(dòng)。可能原因:
 
  a.比色皿在比色皿架中放置的位置不一致,或其表面有液滴。解決方法:用擦鏡紙擦干凈比色皿表面,然后將其安放在比色槽的左邊,上面用定位夾定位。
 
  b.電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法:送修。
 
  4、數(shù)顯不穩(wěn)??赡茉颍?br /> 
  a.預(yù)熱時(shí)間不夠。解決方法:延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因,長(zhǎng)時(shí)間處于工作狀態(tài)時(shí),也會(huì)工作不穩(wěn))。
 
  b.光電管內(nèi)的干燥劑失效,使微電流放大器受潮。解決方法:烘烤電路,并更換或烘烤干燥劑。
 
  c.環(huán)境振動(dòng)過(guò)大、光源附近空氣流速大、外界強(qiáng)光照射等。解決方法:改善工作環(huán)境。
 
  d.光電管、電路等其它原因。
 
  小結(jié)
 
  綜上所述,以下幾個(gè)問(wèn)題應(yīng)引起儀器操作人員注意:
 
  1、比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問(wèn)題:有些使用者對(duì)這個(gè)問(wèn)題不夠重視,因操作不當(dāng)造成偶然誤差,嚴(yán)重影響分析結(jié)果。首先,應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜,就會(huì)使參比樣品與待測(cè)樣品的吸收光徑長(zhǎng)度不一致,還可能使入射光不能全部通過(guò)樣品池,導(dǎo)致測(cè)試比準(zhǔn)確度不符合要求。其次,應(yīng)保證每次測(cè)試時(shí),比色皿架推拉到位。若不到位,將影響到測(cè)試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度。后,還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長(zhǎng)其使用壽命。
 
  2、干燥劑的使用問(wèn)題。干燥劑失效將導(dǎo)致:a.數(shù)顯不穩(wěn)、無(wú)法調(diào)“0”點(diǎn)或“100%”點(diǎn)(電路或光電管受潮)。b.反射鏡發(fā)霉或沾污,影響光效率、雜散光增加。鑒于上述原因,分光光度計(jì)的放置地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤。
 
  3、儀器的工作環(huán)境:應(yīng)避免陽(yáng)光直射、避免強(qiáng)電場(chǎng)、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開(kāi)腐蝕性氣體等。
 
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